Prevalencia de algunas enfermedades infecciosas en bovinos de resguardos indígenas del cauca, colombia, 2017 / Prevalence of some infectious diseases in cattle of the indigenous resguards in cauca, colombia 2017

RESUMEN La zona del Cauca posee resguardos indígenas que han presentado diferentes problemáticas asociadas a la lucha armada en Colombia, lo que ha limitado que las entidades puedan realizar programas de control de enfermedades bovinas. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de algunas enfermedades infecciosas, de carácter reproductivo, en el ganado bovino, de tres resguardos indígenas del Cauca, 2017. Se recolectaron muestras sanguíneas de 30 vacas, para determinar la prevalencia de Neospora caninum, Brucella abortus, diarrea viral bovina (DVB), rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) y Leptospira sp. serovares Hardjo prajitno, bovis y Pomona. Las pruebas, se realizaron por ELISA, rosa de bengala y microaglutinación. Mediante el software R, se efectuó un análisis descriptivo y se determinaron las prevalencias para cada enfermedad, se estimaron las co-infecciones y se realizó un modelo de regresión logística, para determinar el efecto del hato, resguardo, componente racial, grupo etario, número de animales y tamaño del hato, sobre la positividad a las enfermedades. Se encontró una prevalencia del 36%, para N. caninum; 60%, DVB; 30%, IBR; 0%, B. abortus; Leptospira spp. serovares Harjo prajitno, 26%; Hardjo bovis, 12% y Pomona, 10%. De acuerdo con el análisis de riesgo, la seropositividad para DVB e IBR estuvo asociada con el resguardo donde habitaban los animales, en este caso, Tacueyó tuvo más riesgo y estuvo directamente relacionado con el área de los hatos; entre mayor área más animales fueron positivos. En general, se encontró que la situación de la zona es similar a la de otros lugares de Colombia.

ABSTRACT The Cauca region in Colombia has indigenous reservations that have presented different problems associated with the armed conflict, which has limited the entities to carry out bovine disease control programs. Therefore, the aim of this work was to determine the prevalence of some infectious diseases of reproductive traits in cattle of three indigenous resguards in Cauca, 2017. Blood samples of 30 cows were collected to determine the prevalence of Neospora caninum, Brucella abortus, bovine viral diarrhea (BVD), Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and Leptospira sp. serovars Hardjo prajitno, bovis and Pomona. The tests were performed by ELISA, rose bengal and microscopic agglutination. Using R software, a descriptive analysis was carried out and the frequencies for each disease were estimated. In addition, coinfections between diseases were estimated and a logistic regression model was performed to determine the effect of the herd, reservation, racial component, age group, number of animals and size of the farm on the disease positivity. The prevalence was N. caninum 36%, BVD 60%, IBR 30%, B. abortus 0%, Leptospira spp. serovars Hardjo prajitno 26%, Hardjo bovis 12%, y Pomona 10%. According to the risk analysis, the seropositivity for BVD and IBR were associated with the place where the animals lived, in this case Tacueyó, but this was directly related to the size of the herds, since the greater, the area more animals were positive. In general, it was found that the situation in the region is similar to that of other sites in Colombia.

Identificación de factores asociados con la exposición al virus de la diarrea viral bovina (VDVB) en terneras de hatos lecheros de la sabana de Bogotá / Identification of factors associated with exposure to bovine viral diarrhea virus (BVDV) in dairy-herd calves in the Bogotá savanna / Identificação de fatores associados com a exposição ao vírus da diarreia viral bovina (VDVB) em bezerras de fazendas de gado leiteiro da savana de Bogotá

Resumen El virus de la diarrea viral bovina (VDVB) es un patógeno que afecta la salud bovina; produce signos clínicos como bronconeumonía, diarrea, teratogenia y pérdidas reproductivas. El objetivo del estudio fue determinar la seroprevalencia y algunos factores asociados con la exposición al VDVB en un total de 930 terneras provenientes de 31 hatos lecheros de la sabana de Bogotá. Los datos de los hatos se obtuvieron a través de una encuesta epidemiológica, así como la información individual de las terneras. Se utilizó una prueba de ELISA para la detección de anticuerpos contra VDVB p80. Los datos se analizaron con estadística de frecuencias, descriptiva, análisis univariado y con un modelo de regresión logística binaria en el que se evaluaron factores de confusión a través de la comparación entre los odds ratio (OR) crudos y ajustados. La seroprevalencia promedio de VDVB fue del 27,1 % (rango 0-90 %); adicionalmente, en el 83,9 % de los hatos se observaron anticuerpos contra VDVB. Los factores asociados con la exposición a VDVB fueron: 1) la edad en animales menores de 4 meses (OR = 4,9; IC 95 %: 2,52-9,56), 2) histórico de aborto de la madre (OR = 6,4; IC 95 %: 3,91-10,46; p = 0,001) y 3) la presentación histórica de diarrea (OR = 2,6; IC 95 %: 1,58-4,46; p = 0,010). Este estudio permitió confirmar la alta exposición al virus en los hatos e identificar de algunos factores asociados, lo cual contribuye al conocimiento de la epidemiología de la enfermedad.

Abstract Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a pathogen that affects bovine health; it produces clinical signs such as bronchopneumonia, diarrhea, teratogenicity, and reproductive losses. This study aimed to determine seroprevalence and some other factors associated with exposure to BVDV in a total of 930 calves from 31 dairy herds in the Bogotá savanna. The data of the herds, as well as individual information of the calves, were collected through an epidemiological survey. An ELISA test was used to detect antibodies to BVDV p80. Data were analyzed with frequency and descriptive statistics, univariate analysis, and a binary logistic regression model, in which confounding factors were evaluated through a comparison between crude and adjusted odds ratios (OR). The average seroprevalence of BVDV was 27.1% (range 0-90%); additionally, antibodies against BVDV were observed in 83.9% of the herds. The factors associated with exposure to BVDV were: 1) age of animals under 4 months (OR = 4.9; 95% CI: 2.52-9.56); 2) records of abortion of the mother (OR = 6.4; 95% CI: 3.91-10.46; p = 0.001); and 3) records of diarrhea (OR = 2.6; 95% CI: 1.58-4.46; p = 0.010). This study allowed confirming a high exposure to the virus in these herds and identifying some associated factors, which contributes to a better understanding of the epidemiology of the disease.

Resumo O vírus da diarreia viral bovina (VDVB) é um patógeno que afeta a saúde bovina; produz sinais clínicos como broncopneumonia, diarreia, teratógena e perdas reprodutivas. O objetivo do estudo foi determinar a soro prevalência e alguns fatores associados com a exposição ao VDVB em um total de 930 bezerras provenientes de 31 fazendas de gado leiteiro da savana de Bogotá. Os dados dos rebanhos foram obtidos através de uma enquete epidemiológica, assim como a informação individual das bezerras. Utilizou-se uma prova de ELISA para detecção de anticorpos contra VDVB p80. Os dados foram analisados com estatística de frequências, descritiva, análise uni variada e com um modelo de regressão logística binária no qual foram avaliados fatores de confusão através da comparação entre os odds ratio (OR) crus e ajustados. A soro prevalência média de VDVB foi do 27,1 % (rango 0-90 %); adicionalmente, no 83,9 % dos rebanhos se observaram anticorpos contra VDVB. Os fatores associados com a exposição a VDVB foram: 1) a idade em animais menores de 4 meses (OR = 4,9; IC 95 %: 2,52-9,56), 2) histórico de aborto da madre (OR = 6,4; IC 95 %: 3,91-10,46; p = 0,001) e 3) a apresentação histórica de diarreia (OR = 2,6; IC 95 %: 1,58-4,46; p = 0,010). Este estudo permitiu confirmar a alta exposição ao vírus nos rebanhos bovinos e identificar de alguns fatores associados, fator que contribui para o conhecimento da epidemiologia da doença.

Primera evidencia del Virus de Diarrea Viral Bovina (VDVB) genotipo 2 en Colombia / First evidence of Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) genotype 2 in Colombia

RESUMEN El Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) es un patógeno que afecta los hatos bovinos. El virus ha sido clasificado en dos biotipos (citopático y no citopático) y en 3 genotipos (1, 2 y 3) según su secuencia nucleotídica. El propósito de este estudio fue determinar la presencia del VDVB genotipo 2 (VDVB-2) en Colombia, mediante el estudio de cuatro zonas representativas de producción ganadera por medio de RT-PCR en muestras de suero y cartílago de oreja. Para ello, se recolectaron los sueros preparto de 379 vacas, de 274 terneros precalostrales (antes de que se les diera calostro), y de 145 terneros de 25 días post-nacimiento. Adicionalmente, se tomaron 181 biopsias de cartílago de oreja de estos terneros. Se realizó RT-PCR a todas las muestras para determinar la presencia o ausencia del VDVB. Aquellas muestras que resultaron positivas se evaluaron adicionalmente mediante dos métodos para determinar su genotipo: a) una nueva RT-PCR con primers específicos para el VDVB-2, y b) una PCR diferente con la que se obtuvo un producto de 296 pb, el cual se sometió a digestión enzimática. Los resultados mostraron que 17 (4,48%) muestras de suero preparto fueron positivas para Pestivirus, de las cuales 6 correspondieron al VDVB-2 (1,58%). Ninguna de las muestras de suero obtenidas de los terneros resultó positiva para el VDVB-2. Finalmente, 18 (9,9%) biopsias de cartílago de oreja fueron positivas al VDVB, 14 (7,7%) de las cuales resultaron positivas para el VDVB-2. El presente estudio es la primera evidencia documentada de la presencia del VDVB-2 en bovinos de Colombia.

ABSTRACT The bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a pathogen that affects cattle. The virus has been classified into two biotypes (cytopathic and non-cytopathic) and three genotypes (1, 2 or 3) according to their nucleotide sequence. The objective of this study was to determine the presence of the BVDV genotype 2 (BVDV-2) in Colombia, through the study of four representative areas of cattle production by means of RT-PCR conducted on serum and ear notches. For this purpose, sera were collected from 379 prepartum cows, 274 calves born to these cows (before they were given colostrum), and 145 25-day- old calves. Additionally, 181 ear notches were taken from these calves. RT-PCR was performed on all samples to determine the presence or absence of BVDV. Tha samples that tested positive were further assessed by two methods to determine their genotype: a) a new RT-PCR with specific primers for BVDV-2, and b) a different PCR obtaining a product of 296 bp, which was further subjected to enzymatic digestion. The results showed that 17 (4.48%) prepartum sera samples were positive for Pestiviruses, from which 6 corresponded to BVDV-2 (1.58%). None of the sera obtained from the calves were positive for BVDV-2. Finally, 18 (9.9%) ear notches were positive for BVDV, 14 (7.7%) of which were positive for BVDV-2. The present study is the first documented evidence of the presence of the BVDV-2 in cattle from Colombia.

Seroprevalence and risk factors of several bovine viral diseases in dairy farms of San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colombia / Seroprevalencia y factores de riesgo para varias enfermedades virales en bovinos de hatos lecheros de San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colombia / Soroprevalência e fatores de risco para várias doenças virais em bovinos de rebanhos leiteiros do Município de San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colômbia

Bovine viral diarrhea virus (BVDV), Bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) and enzootic bovine leucosis (EBL) are viral infections that cause three of the most important cow diseases in the world. Antibody detection is the quickest and most cost-effective method to detect exposition to the virus. The aim of this study was to determine the seroprevalence and risk factors associated with these diseases in cows from the town of San Pedro de los Milagros, Antioquia. A total of 791 bovines of 24 dairy farms were sampled for blood between may and june of 2014, and analized for antibodies against BVDV and BoHV-1. These 24 farms plus other five were analized for antibodies against EBL for a total of 1003 bovines from 29 farms sampled. All tests were done with ELISA kits commercially available. The risk factors for farm and cow selected were evaluated to analize their relation with the serological state of these three diseases using logistic regression. In general, seroprevalence at the animal level for BVDV BoHV-1 and EBL was 75.7% (95% CI: 68.7-82.6%), 31.1% (95% CI: 22.1-40.1%) and 47.8% (95% CI: 40-55.7%), respectively. The odds ratio of being seropositive for BoHV-1 was significantly higher (OR=3.0) in animals older than 3 years in comparison to bovines younger than a year. Not using disposable needles was associated with prevalence of EBL. In conclusion there was a high seroprevalence of EBL and BVDV, and a lower one for BoHV-1. Seropositivity to BoHV-1 was associated with cows older than 3 years and seropositivity to EBL was associated with not using disposable needles in the farm.

Las infecciones por virus de la diarrea viral bovina (BVDV), el herpes virus bovino-1 (BoHV-1) y la leucosis enzoótica bovina (EBL) causan tres de las enfermedades más importantes de la vaca a nivel mundial. La detección de anticuerpos es el método más rápido y costo-efectivo para detectar la exposición a estos virus. El objetivo de este estudio fue determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo asociados a estas enfermedades en vacas del municipio de San Pedro de los Milagros, Antioquia. Un total de 791 bovinos de 24 hatos lecheros no vacunados fueron muestreados para sangre entre mayo y junio de 2014 y analizados para anticuerpos contra BVDV y BoHV-1. Estos 24 hatos más otros cinco fueron analizados para anticuerpos contra EBL para un total de 1003 bovinos de 29 hatos. Todas las pruebas fueron efectuadas con kits de ELISA disponibles comercialmente. Los factores de riesgo de hato y de vaca seleccionados fueron evaluados para analizar su relación con el estado serológico de estas tres enfermedades por medio de regresión logística. En general, la seroprevalencia a nivel de animal para BVDV, BoHV-1 y EBL fue 75,7% (95% CI: 68,7-82,6), 31,1% (95% CI: 22,1-40,1) y 47,8% (95% CI: 40-55,7), respectivamente. La relación de disparidad de ser seropositivo para BoHV-1 fue significativamente más alto (OR=3,0) en animales mayores de 3 años en comparación con bovinos menores de un año. No usar agujas desechables en la granja estuvo asociada con la prevalencia a EBL. En conclusión hubo una alta seroprevalencia de EBL y BVDV y una baja para BoHV-1. La seropositividad a BoHV-1 estuvo asociada con vacas mayores a tres años y la seropositividad a EBL estuvo asociada con el no uso de agujas desechables en la granja.

As infecções por vírus da diarreia viral bovina (BVDV), herpes vírus bovino-1 (BoHV-1) e leucose enzoótica bovina (EBL) causam três das doenças mais importantes da vaca no mundo todo. A detecção de anticorpos é o método mais rápido e custo-efetivo para detectar a exposição a estes vírus. O objetivo desta pesquisa foi determinar a soroprevalência e os fatores de risco associados a estas doenças em vacas de diferentes rebanhos leiteiros do município de San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colômbia. Um total de 791 bovinos pertencentes a 24 rebanhos leiteiros não vacinados foram amostrados para sangue entre os meses de maio e junho de 2014 e analisados para anticorpos contra BVDV e BoHV-1. Estes 24 rebanhos mais outros cinco foram analisados para anticorpos contra EBL para um total de 1003 bovinos de 29 rebanhos. Todos os testes foram feitos com kits de ELISA disponíveis comercialmente. Os fatores de risco do rebanho e do animal selecionados foram avaliados para analisar sua relação com o estado sorológico de estas três doenças por médio de regressão logística. Em geral, a soroprevalência no animal para BVDV, BoHV-1 e EBL foi 75,7% (95% CI: 68,7-82,6), 31,1% (95% CI: 22,1-40,1) e 47,8% (95% CI: 40-55,7), respetivamente. A relação de disparidade de ser soropositivo para BoHV-1 foi significativamente maior (OR=3,0) em animais maiores de três anos em comparação com os menores de um ano. O fato de não utilizar agulhas descartáveis na fazenda, esteve associada com a prevalência a EBL. Em conclusão, houve uma alta soroprevalência de EBL e BVDV e a sua vez, uma baixa para BoHV-1. A soropositividade a BoHV-1 esteve associada com vacas maiores a três anos e a soropositividade a EBL esteve associada com a não utilização de agulhas descartáveis na fazenda.

Presence of IgG antibodies against reproductive infections in breeding bulls of Magdalena Medio, Colombia / Presencia de anticuerpos tipo IgG contra infecciones reproductivas en toros reproductores de la región del Magdalena Medio, Colombia / Presença de anticorpos IgG contra infecções reprodutivas de touros reprodutores do Magdalena Médio, Colômbia

Background: cattle farming is an important economic activity in several regions of Colombia. However, farmers are unaware of their cattle health status, and particularly of bacterial, parasitic, and viral diseases, which affect reproduction and profitability. Objective: to assess the presence of IgG antibodies against infectious bovine rhinotracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD), bovine leukosis, leptospirosis, brucellosis, and Neospora caninum in breeding bulls in the Magdalena Medio of Colombia, according to age, breed, and origin. Methods: a descriptive, cross-sectional study was conducted with 174 male breeding cattle from several subspecies. Animals were above 18 months of age and belonged to dual-purpose farms in the Magdalena Medio region. Presence of IgG anti-IBR, BVD, brucellosis, neosporosis, and leukosis antibodies were determined with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A sample of 156 males was assessed for leptospirosis using a microscopic agglutination test (MAT) in a dark field. Results: IgG anti-IBR antibodies were found in 92.5% of the animals, anti-BVD in 62.6%, anti-Neospora caninum in 79.3%, anti-Brucella abortus in 4.02%, anti-Leptospira pomona in 8.33%, and anti-L. hardjo in 15.38%, with >1:100 titres. Besides, 64.94% prevalence was observed for bovine leukosis. Conclusions: a high prevalence of IgG anti-IBR, IgG anti-BVD, IgG anti- Neospora caninum, IgG anti-leukosis, and IgG anti-lepstospirosis antibodies were observed in Magdalena Medio bulls. With respect to B. abortus, confirmatory and competitive ELISA test should be performed and sanitary standards need to be established. Detection of IgG antibodies among bulls reveals poor sanitary conditions, absent of protective-vaccination antibodies and an urgent need for health control measurements.

Antecedentes: la ganadería bovina es una importante actividad económica desarrollada en varias regiones del país, sin embargo, los ganaderos desconocen el estado sanitario de los bovinos con respecto a enfermedades bacterianas, parasitarias y virales, lo que afecta la reproducción y la rentabilidad. Objetivo: evidenciar la presencia de anticuerpos tipo IgG anti-rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR), diarrea viral bovina (BVD), leucosis bovina, leptospirosis, brucelosis y Neospora caninum en los toros reproductores del Magdalena Medio colombiano, en asociación con variables de edad, raza y procedencia. Métodos: se realizó un estudio descriptivo de corte transversal en un grupo poblacional de 174 machos reproductores bovinos de diferentes subespecies. Los animales eran mayores de 18 meses en fincas destinadas a ganadería doble propósito ubicadas en la región del Magdalena Medio. Mediante un ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) se determinó la presencia de anticuerpos tipo IgG anti-IBR, BVD, brucelosis, neosporosis y leucosis. Para el caso de la leptospirosis, a 156 de los machos se les realizó la prueba de microaglutinación en campo oscuro (MAT). Resultados: se hallaron anticuerpos tipo IgG anti-IBR en un 92,5%, anti-BVD en el 62,6%, anti-Neospora caninum 79,3%, anti-Brucella abortus 4,02%, anti-Leptospira pomona 8,33% y anti-L. hardjo 15,38%, con títulos >1:100. Además, para leucosis bovina se obtuvo una prevalencia del 64,94%. Conclusión: se observaron altos porcentajes de casos con presencia de anticuerpos IgG anti-IBR, BVD, N. caninum, leucosis y lepstospirosis en el ganado bovino del Magdalena Medio colombiano. Para B. abortus debe realizarse la prueba confirmativa ELISA competitiva y aplicar la norma sanitaria. La determinación de anticuerpos tipo IgG permitió conocer el delicado estado sanitario de los reproductores bovinos, teniendo en cuenta que no han recibido ningún esquema de vacunación y se hace necesario un adecuado control sanitario.

Antecedentes: a pecuária é uma atividade econômica importante em várias regiões do país, no entanto, os agricultores não têm conhecimento do estado de saúde do gado em relação adoenças bacterianas, parasitárias e virais. É por esta razão que as perdas econômicas aumentam e diminuem a qualidade de reprodução. Objetivo: demonstrar a presença de anticorpos IgG para rinotraqueíte-viral bovina (IBR), diarréia viral bovina (BVD), leucose bovina, leptospirose, brucelose e Neospora caninum. Nos machos reprodutores do Magdalena Medio tendo em conta as variáveis idade, raça e origens. Métodos: i foi realizada estudo descritivo transversal em duas populações de 174 machos reprodutores de diferentes subespécies de gado com mais de 18 meses de edad procedentes de fazendas utilizadas para a pecuária de duplo propósito, localizadas na região do Madalena Médio. Para detectar a presença de anticorpos IgG anti-IBR, BVD, brucelose, e enzoótica, neosporose foi determinada pela técnica de ensaio imunoenzimático (ELISA). Para o caso de leptospirose foi realizado teste de microaglutinação em campo escuro (MAT). Resultados: anticorpos IgG anti-IBR foram encontrados em 92,5%, anti-BVD num 62,6%, anti-Neospora caninum num 79,3%, anti-Brucella abortus 4,02%, anti-Leptospira pomona num 8,33% e anti-L. hardjo 15,38% com títulos > 1:100. Para leucose bovina, uma percentagem de 64,94%, foi obtido. Conclusão: foram observados altos percentagens de casos na presença de anticorpos IgG anti-IBR, BVD, N. caninum, lepstospirosis e leucose nos bovinos do Madalena Médio colombiano, o teste confirmatorio ELISA competitivo. Para a determinação de B. abortus deve ser realizado e dar cumplimento a normatividade sanitaria. A determinação de anticorpos IgG tem permitido conhecer o delicado estado sanitario dos reprodutores bovinos, considerando que eles não receberam qualquer vacinação é necessário um adequado controle de saúde.

Detección molecular de coinfección con los virus de la diarrea viral bovina (BVDV) en búfalos de agua (Bubalus bubalis) serológicamente negativos / Molecular analyses detect natural coinfection of water buffaloes (Bubalus bubalis) with bovine viral diarrhea viruses (BVDV) in serologically negative animals

La infección de los búfalos de agua (Bubalus bubalis) con los virus de la diarrea viral bovina (BVDV) ha sido confirmada mediante técnicas serológicas y moleculares en trabajos anteriores. Con el fin de determinar la presencia de animales persistentemente infectados y las especies y subtipos circulantes de BVDV en esta especie animal se realizó un estudio sobre una manada de búfalos de producción mixta con ganado bovino (Bossp.). Nuestros resultados serológicos mostraron un alto nivel de positividad frente a BVDV-1 y BVDV-2 dentro de la manada de búfalos. El análisis molecular sobre muestras de sangre de los animales serológicamente negativos reveló la presencia de ácido nucleico viral, lo que confirma la existencia de búfalos persistentemente infectados. El clonado y la secuenciación de la región 5 'UTR de algunas de las muestras obtenidas de búfalo reveló la presencia de coinfección natural con al menos dos subtipos diferentes de BVDV (1a y 1b) y con las especies virales BVDV-1 y BVDV-2

Infection of water buffaloes (Bubalus bubalis) with bovine viral diarrhea viruses (BVDV) has been confirmed in several studies by serological and molecular techniques. In order to determine the presence of persistently infected animals and circulating species and subtypes of BVDV we conducted this study on a buffalo herd, whose habitat was shared with bovine cattle (Bossp.). Our serological results showed a high level of positivity for BVDV-1 and BVDV-2 within the buffalo herd. The molecular analyses of blood samples in serologically negative animals revealed the presence of viral nucleic acid, confirming the existence of persistent infection in the buffaloes. Cloning and sequencing of the 5' UTR of some of these samples revealed the presence of naturally mix-infected buffaloes with at least two different subtypes (1a and 1b), and also with both BVDV species (BVDV-1 and BVDV-2)

Molecular analyses detect natural coinfection of water buffaloes (Bubalus bubalis) with bovine viral diarrhea viruses (BVDV) in serologically negative animals.

Infection of water buffaloes (Bubalus bubalis) with bovine viral diarrhea viruses (BVDV) has been confirmed in several studies by serological and molecular techniques. In order to determine the presence of persistently infected animals and circulating species and subtypes of BVDV we conducted this study on a buffalo herd, whose habitat was shared with bovine cattle (Bossp.). Our serological results showed a high level of positivity for BVDV-1 and BVDV-2 within the buffalo herd. The molecular analyses of blood samples in serologically negative animals revealed the presence of viral nucleic acid, confirming the existence of persistent infection in the buffaloes. Cloning and sequencing of the 5' UTR of some of these samples revealed the presence of naturally mix-infected buffaloes with at least two different subtypes (1a and 1b), and also with both BVDV species (BVDV-1 and BVDV-2).

Development of an enhanced bovine viral diarrhea virus subunit vaccine based on E2 glycoprotein fused to a single chain antibody which targets to antigen-presenting cells.

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is an important cause of economic losses worldwide. E2 is an immunodominant protein and a promising candidate to develop subunit vaccines. To improve its immunogenicity, a truncated E2 (tE2) was fused to a single chain antibody named APCH, which targets to antigen-presenting cells. APCH-tE2 and tE2 proteins were expressed in the baculovirus system and their immunogenicity was firstly compared in guinea pigs. APCH-tE2 vaccine was the best one to evoke a humoral response, and for this reason, it was selected for a cattle vaccination experiment. All the bovines immunized with 1.5 µg of APCH-tE2 developed high levels of neutralizing antibodies against BVDV up to a year post-immunization, demonstrating its significant potential as a subunit vaccine. This novel vaccine is undergoing scale-up and was transferred to the private sector. Nowadays, it is being evaluated for registration as the first Argentinean subunit vaccine for cattle.

Seroprevalencia de la diarrea viral bovina en rebaños lecheros de dos municipios del estado Barinas, Venezuela / Seroprevalence of bovine viral diarrhea in milk producing herds at Barinas State, Venezuela

Este estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de la diarrea viral bovina (DVB) en bovinos lecheros, sin antecedentes de vacunación, representativos de los municipios Pedraza y Barinas del estado Barinas, Venezuela, durante el periodo comprendido entre mayo y noviembre 2007. Se determinó la presencia de anticuerpos (Acs) específicos contra el virus de la DVB (VDVB) en suero, mediante la prueba de ELISA indirecta, asociando la seropositividad entre sexos, grupos etarios y número de partos, mediante la prueba de Chi cuadrado. Un total de 223 de 353 sueros resultaron positivos a la presencia de Acs específicos contra el VDVB, indicando una alta prevalencia (63,2%). La proporción de seropositivos en ambos municipios analizados demostró ser no significativa (p=0,1572). Con respecto a la proporción de hembras que resultaron seropositivas (63,1%) y la de machos seropositivos (63,6%), revelan que el sexo no está relacionado con la infección por el virus (p=1,0000). La mayor edad y número de partos mostraron una mayor seropositividad (p=0,0111 y p=0,0086, respectivamente). La presencia de actividad viral en la zona aunada al manejo inadecuado de los animales contribuyen a la difusión y transmisión de la enfermedad.

The purpose of this study was to determine seroprevalence of bovine viral diarrhea (BVD) in milk producing bovines with no vaccination background, representative of Pedraza and Barinas municipalities at Barinas State, during the May-November 2007 period. The presence of specific antibodies (Abs) against the BVD virus (BVDV) in serum through the indirect ELISA test was determined, associating seropositivity to sex, age group, and number of births with the Chi square test. A total of 223 from 353 sera were positive for Abs against the BVDV, indicating a high prevalence (63.2%). The difference of the ratio of seropositives between both municipalities was not significant (p=0.1572). The rates of seropositive females (63.1%) and seropositive males (63.6%) reveal that sex is not related to the viral infection (p=1.0000). Older age and larger number of births showed greater positivity (p=0.0111 and p=0.0086 respectively). The presence of viral activity in the area together with the inadequate handling of the animals contribute to the diffusion and transmission of the disease.

Presencia del virus de la diarrea viral bovina y su asociación con otros cuadros patológicos en ganado en corral de engorda / Presence of bovine virus diarrhea in association with other pathologies in feedlot cattle

Bovine feedlots are intensive production systems of significant importance in Mexico. The present study describes the presence of bovine virus diarrhea (BVD) causing subacute to chronic lesions in feedlot cattle, associated with other pathologies. Animals included in this study were discarded after they received therapy several times due to chronic pneumonia, or anaplamosis. Bovine virus diarrhea antigen was identified by immunohistochemistry in small intestine and myocardium in six cases of chronic suppurative bronchopneumonia with extensive areas of casseous necrotic bronchiectasis, previously diagnosed as Mycoplasma bovis pneumonias (retrospective group, n = 6). Furthermore, based on characteristic histopathologic lesions other nine cases were included (prospective group, n = 9). Bovine virus diarrhea antigen was recognized in two animals with pneumonic lesions, including a case with fibrinous bronchopneumonia as well as suggestive lesions of infectious bovine rinotracheitis (1/9), and another one with suppurative bronchopneumonia and myocarditis suggestive of Histophilus somni (1/9). In addition, one positive case was associated to anaplasmosis (1/9). Other two positive cases showed a conspicuous fibrinous peritonitis (2/9). The rest of the animals in this group resulted negative (4/9). Histopathological characteristics of the lesions and their association with the antigen in situ confirm the presence of BVD. This presentation is compatible with the acute infection syndrome. This is the first report of BVD infection and concomitant pathologies in feedlot cattle in Mexico.

El ganado en corral de engorda es un sistema de producción intensivo de gran importancia en México. En este trabajo se describe la infección por diarrea viral bovina (DVB), ocasionado por lesiones subagudas y crónicas en bovinos en corral de engorda, y su asociación con otras patologías. Los animales de este estudio fueron considerados de rechazo después de ser tratados en diferentes ocasiones por enfermedad respiratoria, o bien anaplasmosis. El antígeno de DVB fue identificado por inmunohistoquímica (IHQ) en intestino delgado y miocardio en seis casos de bronconeumonía supurativa crónica con extensas áreas de bronquiectasia con necrosis caseosa, los cuales habían sido previamente diagnosticados como neumonías por Mycoplasma bovis (grupo retrospectivo, n = 6). Además, se incluyeron otros nueve casos con base en las características histopatológicas de las lesiones (grupo prospectivo, n = 9). El antígeno de DVB se reconoció en dos animales con lesiones neumónicas, uno de ellos con bronconeumonía fibrinosa, incluyendo además lesiones probables de rinotraqueítis infecciosa bovina (1/9), y el otro con bronconeumonía supurativa y también miocarditis probable por Histophilus somni (1/9). Adicionalmente, un caso positivo estuvo asociado a anaplasmosis (1/9). Otros dos casos positivos presentaron una distintiva peritonitis fibrinosa (2/9). El resto de los animales de este grupo resultaron negativos a DVB (4/9). Las características histopatológicas de las lesiones y su asociación con el antígeno in situ, confirman la presencia de DVB. Esta presentación es compatible con el síndrome denominado infección aguda. Este es el primer informe de infección por DVB y otras patologías concomitantes en ganado de engorda en México.

In vitro amplification of BVDV field strains isolated in Argentina: effect of cell line and culture conditions / Amplificación in vitro de cepas de campo de virus de la diarrea viral bovina (VDVB) aisladas en Argentina: efecto de la línea celular y las condicioes de cultivo

The aim of this work was to study the in vitro amplification of BVDV (Pestivirus, Flaviridae) field isolates from Argentina in MDBK, BoTur and BHK-21 continuous cell lines. Field isolates 99/134 (mucosal disease), 00/693 (mucosal disease), 04P7016 (respiratory disease) and 04/89 (mucosal disease), genotype 1b, were used and compared with the Singer and NADL reference strains, genotype 1a. Additionally, cell lines derived from explants of bovine testis (RD- 420), bovine uterus (NCL-1) and porcine kidney (PKZ) were tested as alternative substrates for BVDV propagation in vitro. The effect of cell line, harvest time and infection protocol was evaluated. The viral titers observed depended on the virus and harvest time but not on the infection protocol. We found that MDBK and BoTur cell lines were susceptible to the infection whereas BHK-21 and PKZ were not. NADL viral titers, 00/693 and 04/89, increased from 24 to 48 h p.i. in BoTur cells and then reached a plateau, whereas those of 99/134 and 04P7016 remained constant between 24 and 72 h p.i. BVDV Singer, on the other hand, presented a maximum titer at 24 h p.i. and then decreased. BVDV-NADL titers increased in MDBK and NCL-1 but not in RD-420 between 24 and 48 h p.i., and then decreased at 72 h p.i. These facts lead us to conclude that neither the subgenotypes (1a, 1b) nor the clinical symptoms of the animal from the virus had been isolated seem to affect the virus cell line kinetics of viral replication in vitro. On the other hand, the most homogenous behavior, the most similar replication curves, and highest titers observed in MDBK and NCL-1 seem to indicate that these lines are generally more susceptible to BVDV replication.

Se estudió la interacción de aislamientos de campo de Argentina del VDVB (Pestivirus, Flaviridae) en las líneas celulares continuas MDBK, BoTur y BHK-21. Se utilizaron los virus de campo genotipo 1b, 99/134, 00/693 (casos compatibles con enfermedad de las mucosas) y 04P7016 (cuadro respiratorio) y las cepas de referencia genotipo 1a Singer y NADL. Además se evaluó la interacción de VDVB-NADL con las líneas celulares experimentales de bovino RD-420 y NCL-1 y de riñón porcino (PKZ). Se usaron 2 protocolos de infección. Los títulos virales observados dependieron del virus y del tiempo de infección y no así del modo de infección. Mientras que MDBK y BoTur resultaron susceptibles a la infección, BHK-21 y PKZ no lo fueron. Los virus NADL, 00/693 y 04/89 incrementaron su título entre las 24 y las 48 h p.i. en BoTur para mantenerlo posteriormente; los virus 99/134 y 04P7016 no presentaron variaciones y la cepa Singer presentó título máximo a las 24 h p.i para luego descender. La cinética del virus NADL en las células MDBK, RD-420 y NCL-1 tuvo un incremento de título para MDBK y NCL-1 entre las 24 y 48 h p.i que descendió a las 72 h p.i. La interacción virus-línea celular no estaría relacionada con el sub-genotipo del virus (1a o 1b), ni con el cuadro clínico; las células MDBK y NCL-1 serían más susceptibles a la replicación del VDVB.

Evaluation of experimental vaccines for bovine viral diarrhea in bovines, ovines and guinea pigs / Evaluación de vacunas experimentales para la diarrea viral bovina en bovinos, ovinos y cobayos

The bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection control should be based on elimination of persistently infected animals and on immunization through vaccination, to prevent fetal infection. However, the efficacy of inactivated BVDV vaccines is variable due to its low immunogenicity. This study evaluated the humoral immune response against homologous and heterologous strains of 7 inactivated BVDV vaccines, in bovines and two experimental models (ovine and guinea pig) which might be used to test candidate vaccines. Vaccines formulated with BVDV Singer, Oregon, NADL, and multivalent, induced seroconversion in the three animal models studied, reaching antibody titres higher than 2. Vaccine containing 125C -genotype 2- only induced a low antibody response in ovine, while VS-115 NCP vaccine was not immunogenic. Furthermore, bovine sera at 60 dpv presented homologous as well as heterologous antibody response, indicating a high degree of cross-reactivity among the strains studied. However, when bovine sera were tested against the Argentine field strain 00-693, they showed the lowest levels of cross-reactivity, suggesting the need of continued surveillance to identify and characterize emerging field BVDV strains. Finally, optimal correlations between bovine-ovine and bovine-guinea pig models were observed, indicating that two alternative species could replace bovines when testing the immunogenicity of BVDV candidate vaccines.

El control del virus de la diarrea viral bovina (VDVB) se basa en la eliminación de animales persistentemente infectados, y la inmunización de hembras para prevenir infecciones fetales. La eficiencia de estas vacunas es variable por su baja inmunogenicidad. Se evaluó la respuesta inmune humoral contra virus homólogos y heterólogos de 7 vacunas experimentales inactivadas del VDVB en bovinos y en dos modelos experimentales (ovinos y cobayos). Las vacunas conteniendo VDVB Singer, Oregon, NADL y polivalentes indujeron seroconversión en los tres modelos y se alcanzaron títulos de anticuerpos mayores de 2. La vacuna con VDVB genotipo 2 VS-115, NCP, no resultó inmunogénica. La vacuna genotipo 2 125C sólo indujo baja respuesta humoral en ovinos, mientras que la VS-115, NCP, no resultó inmunogénica. En bovinos se determinó la respuesta a virus homólogos y heterólogos a 60 dpv, lo que indica un alto grado de inmunidad cruzada entre la mayoría de las cepas estudiadas. Cuando los sueros bovinos fueron ensayados con la cepa de campo de Argentina 00-693, los niveles de reacción cruzada fueron más bajos; esto sugiere la necesidad de una vigilancia epidemiológica sostenida a fin de identificar y caracterizar las cepas emergentes del VDVB. La óptima correlación en el modelo bovino-ovino y bovino-cobayo indica su utilidad para evaluar la inmunogenicidad de vacunas inactivadas de VDVB.

Detection of bovine viral diarrhea virus by amplification on polycation-treated cells followed by enzyme immunoassay / Detección del virus de la diarrea viral bovina por amplificación sobre células tratadas con policationes seguida de enzimoinmunoensayo

A bovine viral diarrhea virus (BVDV) amplification method combined with an enzyme immunoassay was developed to detect BVDV antigens in seropositive cattle. Reconstitution assays conducted by adding decreasing amounts of BVDV (Singer strain) to Madin-Darby bovine kidney (MDBK) cells showed that the sensitivity threshold of the combined assay was 10-7 TCID50. BVDV amplification was carried out in polycation (DEAE-Dextran and polybrene)- treated MDBK cells. Treated cells were able to replicate both ether-treated virus and neutralizing antibody-coated virus. Ammonium chloride decreased virus replication in polycation-treated cells, suggesting viral penetration by endocytosis. BVDV detection was tested in leukocytes from 104 seropositive cattle from 2 unvaccinated commercial closed dairy herds with high seroprevalence. Lysates and co-cultures of peripheral blood leukocytes (PBL) were tested, directly or after up to 6 blind passages in normal or polycation-treated cells. BVDV was detected in 10/104 cattle after only one co-culture of PBL in treated cells. No virus was detected in whole blood or plasma samples. BVDV positive and negative cattle were retested three times, achieving consistent results. The finding of immune carriers supports the possibility that these animals may constitute an epidemiological risk.

Se desarrolló un método de detección de antígenos del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) combinando amplificación viral con enzimoinmunoensayo. El método combinado presentó una sensibilidad de 10-7 TCID50 en ensayos con diluciones decrecientes de BVDV cepa Singer sobre la línea celular MDBK. La amplificación del título viral se efectuó sobre células MDBK tratadas con policationes Estas células replicaron tanto el BVDV tratado con éter como el unido a anticuerpos. La replicación viral en las células tratadas disminuyó ante la presencia de cloruro de amonio, lo que sugiere la penetración viral por endocitosis. El BVDV se determinó en leucocitos de 104 bovinos seropositivos de dos rodeos en producción, cerrados y con alta seroprevalencia. Los leucocitos de sangre periférica (LSP) fueron lisados y analizados directamente o luego de hasta 6 pasajes ciegos sobre células normales o tratadas con policationes. El BVDV se detectó en 10 de los 104 animales después de solamente un cultivo de LSP en células tratadas. No se pudo detectar presencia viral en las muestras de sangre o plasma. Los estudios se repitieron tres veces en animales BVDV positivos y negativos, con resultados consistentes. El hallazgo de bovinos seropositivos portadores del virus indica la posibilidad de que estos animales puedan significar un riesgo epidemiológico.